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摘要:本文是由ARC獸醫人員設計的小鼠麻醉指導原則,旨在提供一般建議。這并不意味著它包含了適用于小鼠的所有可能藥物組合的詳盡列表。具體的麻醉方案應根據特定情況和研究需求與所在機構的獸醫合作制定。本文是由ARC獸醫人員設計的小鼠麻醉指導原則,旨在提供一般建議。這并不意味著它包含了適用于小鼠的所有可能藥物組合的詳盡列表。具體的麻醉方案應根據特定情況和研究需求與所在機構的獸醫合作制定。
麻醉是使動物完全或部分失去感覺,伴隨或不伴隨意識喪失。動物可能需要麻醉進行手術、可能引起疼痛的非手術操作,或需要固定的非疼痛操作。在麻醉前、麻醉過程中和麻醉后,必須采取措施確保動物的安全和麻醉的有效性。
麻醉可通過胃腸外給藥或吸入給藥的方式進行。藥物的選擇取決于具體操作、研究目的和其他因素,如動物的年齡。對于新生小鼠,有些特別考慮下文進行了概述。如對藥物選擇有疑問,請咨詢所在機構的獸醫。
01 麻醉的一般指導原則和注意事項
適應期:建議所有動物在運輸后適應一周,以防止應激引起的反應。動物至少需要72小時才能恢復到基本生理狀態。
禁食:由于小鼠無法嘔吐,通常麻醉前無需禁食。然而,如需禁食(例如為了保持體重),因小鼠的高代謝率,禁食時間不應超過2-3小時。請注意,切勿限制飲水。
眼睛保護:在麻醉狀態下,小鼠的眼睛會持續睜開,可能導致角膜干燥和損傷。因此,在如下條件下,應涂抹眼膏(如Puralube? 或 Lacrilube?)來保護眼睛。
麻醉持續時間超過 5 min;
通過面罩進行麻醉。
監護:無論使用何種麻醉劑,均應監測麻醉狀態下的小鼠,以確保心臟和呼吸功能不被過度抑制,以及麻醉深度適當。
在沒有專用設備的情況下,可以監測以下麻醉小鼠的參數:
麻醉深度:通過掐指檢查;
呼吸頻率和模式:正常未受干擾的呼吸率約為 180 bpm,麻醉期間可接受 50% 的緩慢下降速率;
粘膜顏色:應為粉紅色而非藍色或灰色;
體溫:可使用直腸溫度計監測體溫,體溫應保持在 36℃ 以上;
血氧飽和度和心率:可用專用的嚙齒類動物脈搏式血氧儀監測血氧飽和度 (> 95%) 和心率(300-800 bpm);
如對監護或監護設備有任何問題,請與所在機構的獸醫聯系。
保溫:所有種屬在麻醉狀態下均存在低體溫的風險。小鼠由于體表面積與體重比高,尤其容易受到影響。低體溫對動物會產生顯著的生理應激,可能延長恢復時間并有潛在致命風險。
在所有麻醉過程中提供額外的保溫措施。
補充熱源包括循環水毯、電熱墊和可在微波或水浴中加熱的市售產品(如等溫墊或凝膠加熱器)。
切勿直接將動物放在熱源上。
如對使用或購買額外的保溫來源有疑問,請與您所在機構的獸醫聯系。
補液:在麻醉時間較長或動物患病、老年或虛弱的情況下,考慮腹腔或皮下注射溫熱的液體。更多信息請咨詢您的獸醫。
恢復:持續監測動物直至其完全恢復。
在干凈的籠子里,將動物放在紙巾上(不使用墊料)。這樣可以最大程度地減少氣管阻塞或肺炎的風險。
麻醉后的動物單獨放在一個籠子里進行恢復。
恢復期間繼續提供額外的保溫。
當動物能夠走動時,將其送回原籠中子,并提供飼料和水。
根據所進行的手術,為了避免同籠伙伴啃縫線或切口處的創傷,小鼠可能需要在術后階段單獨飼養。任何單獨飼養的計劃都應包括在IACUC方案中,以便進行審查和批準。
02 麻醉藥物和程序
吸入麻醉劑: 異氟烷是首選的吸入麻醉劑。 起效快、恢復可靠。
A. 吸入麻醉可以通過滴瓶法、誘導室、面罩或氣管插管使用精密蒸汽器進行。
i.滴瓶法:
a.請勿使小鼠直接接觸液體吸入麻醉劑(可通過在棉花或紗布上放置不可滲透的網格來實現)。
b. 由于無法控制室內的麻醉劑濃度,并且濃度可能迅速達到有毒水平,因此該方法僅適用于非常短的手術,如尾部活檢、皮下腫瘤植入或面罩麻醉前的誘導。
ii.誘導室、面罩和氣管插管:
a.這些需要配備氧氣源和精密蒸發器的氣體麻醉機。一些研究單位可能使用室內空氣而不是純氧作為氣源,這也是可接受的。
b.蒸發器必須與特定的吸入麻醉劑兼容。
c.由于小鼠呼吸能力較小,使用非循環呼吸系統。
iii. 當使用吸入性麻醉時,使用通風柜或配備氣體清除系統的麻醉系統,以盡量減少職業暴露于排出氣體。
B. 注射麻醉劑:氯胺酮/賽拉嗪聯合使用是小鼠的首選注射麻醉劑。
下面列出了其他常用的注射劑。
i. 小鼠對各種麻醉藥的敏感性差異顯著。 年齡、體質、品系、健康狀況、基因調控和性別等因素都可能影響麻醉敏感性。以下劑量僅為一般指導原則,基于上述因素可能存在顯著差異。在您的方案中添加麻醉劑時,建議提供一個范圍,以允許根據每只動物的特定需求進行給藥。
ii. 不建議在小鼠中進行肌肉注射(IM),因為可能導致組織刺激、跛行和自殘等并發癥。
*一個很好的初始方案是 100 mg/kg 氯胺酮和 7 mg/kg 塞拉嗪。**阿替美唑(5 mg/mL)是右美托咪定(0.5 mg/mL)濃度的 10 倍。
您需要 4-6 倍于右美托咪定體積的阿替美唑(5 mg/mL)來逆轉右美托咪定。然而,阿替美唑的安全范圍非常高,因此如果逆轉非常緊急,給予右美托咪定等體積的阿替美唑,可使阿替美唑的劑量增加 10 倍,這是安全的。
同樣,使用與塞拉嗪(20 mg/mL)等體積的阿替美唑 (5 mg/mL) 逆轉也有效。雖然塞拉嗪具有更高的濃度(20 mg/mL),但阿替美唑(5 mg/mL)更純凈,且與α2 受體結合更緊密,因此等體積逆轉塞拉嗪也可行。
C. 注射麻醉劑的一種類型是局部麻醉劑。
i. 局麻藥通過特異性結合神經細胞膜上的電壓門控 Na + 通道來阻斷神經沖動。
ii. 給藥途徑包括粘膜(鼻、眼等)局部給藥或直接注射到組織和神經束周圍。
iii. 在疼痛刺激(如切口)之前給予局部麻醉劑被認為是輔助鎮痛藥物,與阿片類和 非甾體抗炎藥(NSAID)一起使用。
iv. 由于持續時間較短(數小時),不鼓勵將局部麻醉劑作為主要鎮痛藥物使用,
03 對小鼠麻醉的特殊考慮:仔鼠麻醉
目前文獻中描述了幾種適用于新生嚙齒動物的麻醉方法,包括注射麻醉、吸入麻醉和低溫麻醉。
新生嚙齒動物的麻醉會導致親代啃食后代的問題??赏ㄟ^確保新生仔鼠完全恢復后再歸還給母鼠來減少這種情況。其他措施包括讓幼仔接觸來自于母鼠籠中的污染墊料,并將幼仔放在窩仔中間位置。
低溫麻醉
低溫麻醉只適用于7日齡以下的新生嚙齒動物,并且不應用于持續時間超過30分鐘的手術。
動物不應直接置于冰上(在動物和底層冰浴之間使用乳膠手套或其他物質)。
當足部反射消失時,動物已達到適當的麻醉水平。
手術過程中請勿使用白熾燈,因為它會使手術區域變熱,導致動物從手術麻醉狀態中蘇醒。
麻醉后,動物應緩慢復溫??焖偕郎乜赡軙е陆M織損傷??墒褂醚h水毯、加熱墊 (40℃) 或培養箱 (33℃) 中給動物重新升溫。
幼仔能夠在無直接物理刺激的情況下移動后,可將其歸還給母鼠。
吸入麻醉
新生嚙齒動物可能比成年嚙齒動物需要更長的吸入麻醉誘導時間。
在麻醉盒中進行誘導通常需 5% 異氟烷,維持(麻醉誘導盒或鼻錐)需 1-2%(流速 = 0.3-0.6 L/min)。
注射麻醉
氯胺酮/塞拉嗪是 7 日齡以上小鼠的推薦注射麻醉劑:通過 27g 針頭 IP 注射 50-150 mg/kg 氯胺酮和 5-10 mg/kg 塞拉嗪(最大體積 = 0.5 mL)。
對于7日齡以上的小鼠,推薦使用氯胺酮/塞拉嗪作為注射麻醉劑:使用27g針頭腹腔注射50-150 mg/kg氯胺酮和5-10 mg/kg塞拉嗪(最大體積=0.5 ml)。
來源:實驗動物那些事兒
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